[微懂 微免]EP1實驗室怎麼診斷武漢肺炎?

Last Updated on 2020-02-19 by Dr. Joseph

 

雖然武漢肺炎(嚴重特殊傳染性肺炎，新冠肺炎，病原體初步判定2019新型冠狀病毒，2019-nCoV）疫情還在發展中，想要來評論兩句，實在是太早。但是，可以來了解一下實驗室的診斷方法。

2020年1月11日，上海市公共衛生臨床中心、華中科技大學武漢中心醫院、武漢市疾病預防控制中心中心、中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所聯合澳洲雪梨大學，在Virological網站上發布了「武漢肺炎」病例中的新型冠狀病毒基因組序列資訊。

多家生物科技公司隨即根據病毒基因序列進行了相應的PCR檢測產品設計。檢體運到位於北京，進行病毒分離和核酸檢測，每天可檢測樣本200多份，結果返回約需要3至5天。

2020年1月13日，碩世生物公告開發新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒以及冠狀病毒通用型核酸檢測試劑盒。1月15日，華大基因下屬深圳華大因源醫藥科技有限公司聲稱成功研發了新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒。1月20日，達安基因及西隴科學也表示研發出病毒檢測試劑盒。

2020年1月16日，武漢市衛健委表示，湖北省收到研製出的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒後，病毒檢測速度大為加快，每天可檢測樣本數升至近2000份，預計從採樣開始到結果返回約需要2天左右的時間。

2020年2月12日，由於媒體報道核酸檢測多次出現假陰性，湖北省將尚不具備病原學證據，但具備臨床表現、肺炎影像學特徵的患者列為臨床診斷病例。

而台灣是怎樣做的呢?

人體的遺傳資訊，基因，是寫在DNA(去氧核醣核酸)上，而2019新型冠狀病毒是「寫」在RNA(核醣核酸)。所謂的「病毒核酸檢測」，根據衛生福利部疾病管制署檢驗及疫苗研製中心公告，是以分子生物學的技術來檢測檢體中是否有 2019-nCoV 病毒，利用

即時定量反轉錄聚合酶連鎖反應(real-time RT-PCR)

此系統的定量原理是利用一標記兩種螢光的 DNA 探針來偵測聚合酶鏈反應的產物。此 DNA 探針的 5’端標記一報告染劑（reporter dye），3’端則標記一遮蔽染劑（quencher dye），完整的 DNA 探針其報告染劑所散發出的螢光會被遮蔽染劑所掩蓋。當聚合酶進行延伸反應（extension phase）時，具有從 5’端 DNA 切割活性的 DNA 聚合酶將探針切割，使得 5’端報告染劑與 3’端遮蔽染劑分開，遮蔽效應被破壞，此時即可偵測到螢光反應。

簡單來說，聚合酶連鎖反應(PCR)的原理，就像在一本厚厚的書裡面，要找到一篇特定的文章。不需要把整本書讀完，節省許多人力物力。路人甲只會讀這一篇文章的前20個字，路人以只會讀最後20個字。如果兩人在同一頁上，都找到自己會讀的一段文字，就可以確定這一篇文章寫在這一頁紙上。實務上，為了增加準確率與降低錯誤率，在這一段病毒RNA上，選了三段；要得到三段皆陽性的結果，才能確診。

核酸檢測使用到的試劑，耗材與儀器，不是特別訂製的，其實都是醫院，學校，檢測機構原本就具備的。2020年1月21日，疾管署公布8所合約醫院，可以執行「新型冠狀病毒核酸檢測」，包含：三軍總醫院、國立台灣大學醫學院附設醫院、國立成功大學醫學院附設醫院、中國醫藥大學附設醫院、中山醫學大學附設醫院、高雄榮民總醫院、林口長庚紀念醫院、花蓮慈濟醫院。為何不能每間醫院都執行檢查?我猜想，主要是因為標準化(SOP)與品質管制(QC)的考量。如果把沒有患病的人，誤以為是檢查陽性，應該會非常嚇人!

一般的臨床工作裡，核酸檢驗也是很重要的，泌尿科最常見的就是淋病的診斷。

淋病是奈瑟氏淋病雙球菌所引起的感染，屬於可以治療痊癒的「性病」之一。症狀可能出現尿道有膿性的分泌物、解尿疼痛等尿道炎症狀；因此第一步，最傳統的診斷方法，就是醫師進行身體檢查，目視是否有分泌物。但是一部分病人完全正常而看不出異狀，另一部分病人分泌物很多，卻無法排除其他感染(例如披衣菌、單純泡疹、滴蟲等)。

第二步，要靠實驗室的檢查診斷淋病，由子宮頸內或尿道取樣，做格蘭氏染色或是細菌培養。前者，若在顯微鏡下發現中性白血球細胞內有格蘭氏陰性的雙球菌，則可診斷為淋病(敏感度只有50~60%)；後者，單次標本的細菌培養，可診斷85%的淋病感染。

第三步，自1990年代後發展出各種核酸放大檢驗法（NAAT），將檢體之DNA或RNA增量放大後，經由核酸雜交的方法檢驗是否有淋病雙球菌RNA，這種檢測技術診斷淋病的敏感度為95%左右。在歐美國家，甚至會建議青少年在「瘋狂的周末夜」後，進行這一個檢查，達到早期診斷的公衛目的。

臨床工作中，對於有尿道黃濁色分泌物的病患，我會採取第二種方法:

執行取樣培養的方式，並先投與口服第一線抗生素一周；等待細菌培養結果，再考慮單次肌肉注射藥物的治療。

而核酸檢驗方式，健保不給付，必須自費約2000元，所以不是每一位病患都同意檢查。反之，有時病患在「不安全的性行為」後，前來做檢查，因為目視之下沒有尿道分泌物，所以也沒有辦法進行前述(第二種辦法)的「取樣培養」，只能考慮第三種辦法了。

 

參考資料:

2019冠狀病毒病疫情

衛生福利部疾病管制署檢驗及疫苗研製中心 2019-nCoV 病毒核酸檢測

淋病的診斷

C. trachomatis/ N. gonorrhoeae 快速分子檢測; 披衣菌/ 淋病快速分子檢測